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本试剂盒提供了简单而又超快速地配制相应浓度SDS-PAGE凝胶所需的所有试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制Tris-HCl缓冲系统的12%浓度的SDS-PAGE凝胶。

本系列产品的上层胶浓度为4%，下层胶有6%、8%、10%、12%和15%共5种常见浓度供您选择，也可以考虑选购可以配制各种不同浓度SDS-PAGE凝胶的一步法SDS-PAGE胶快速制备试剂盒(货号：YTB4643)。

• 本试剂盒使用便捷。本试剂盒将SDS-PAGE凝胶配制所需试剂混合成下层胶预混液和上层胶预混液，使用前仅需加入适量10%凝胶聚合催化剂和TEMED，混匀后即可灌胶。
  
• 本试剂盒使用一步法配胶，快速高效。本试剂盒优化了配方，灌注下层胶(即分离胶)后，无需液封可直接加入上层胶(又称浓缩胶、堆积胶或积层胶)，一步完成制胶，节约配胶时间。
  
• 本试剂盒上层胶为红色，指示清晰。本试剂盒的SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液含电泳时无迁移红色染料，可使蛋白上样孔一目了然，便于上样，且易于判断上样孔是否歪曲或破损。该红色染料可以稳定存在于上层胶中，不会随着电泳进入下层胶，不影响电泳和染色效果，有助于电泳后辨别并切除上层胶，便于后续转膜等实验的进行。
  
• 本试剂盒配制的SDS-PAGE凝胶，具有优良的分离效果。电泳后蛋白条带平整、清晰、细腻、锐利，特别是小分子蛋白质条带更清晰。

• 两种预混液及TEMED均需4℃避光保存。凝胶聚合催化剂更宜室温保存，4℃保存时需拧紧瓶盖注意防潮，受潮后会很快失效。凝胶聚合催化剂用水配制成10%溶液后，分装成小管-20℃保存，通常半年内有效。
  
• 凝胶聚合催化剂配制成10%溶液后，应当-20℃保存，推荐使用超纯水配制。同时应尽量减少室温存放时间，以防失效。凝胶聚合催化剂每次应适量配制，并尽量使用新鲜配制的10%凝胶聚合催化剂溶液。超纯水推荐使用无菌超纯水(货号：YT999)。
  
• SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液长期静置后染料可能会出现沉淀，不影响正常使用，使用前请摇晃均匀。
  
• TEMED易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当调节凝胶聚合催化剂和TEMED的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
  
• 下层胶预混液和上层胶预混液中含有Acr-Bis，对人体有毒，操作时请特别小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
  
• TEMED易燃，有腐蚀性，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其它物品。

• 根据目的蛋白的分子量大小选择合适浓度的SDS-PAGE下层胶(即分离胶)。
  不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围如下：
  

  SDS-PAGE分离胶浓度	最佳分离范围
  6%胶	50～150kDa
  8%胶	30～90kDa
  10%胶	20～80kDa
  12%胶	12～60kDa
  15%胶	10～40kDa

• 称取适量凝胶聚合催化剂，用超纯水或其它高纯度的水配制10%凝胶聚合催化剂溶液。例如称取0.1g凝胶聚合催化剂，用超纯水溶解并定容到1mL，即为10%凝胶聚合催化剂溶液。
  注：凝胶聚合催化剂溶液容易失效，建议分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。超纯水推荐使用无菌超纯水(货号：YT999)。
  
• 配制一块常用PAGE胶(胶板宽度为10厘米)所需下层胶和上层胶体积(下层胶按6厘米高度计算，上层胶按1.5厘米高度计算，均含约0.3mL的冗余量)参见下表。
  

  凝胶厚度	下层胶体积	上层胶体积
  0.75mm	4.0mL	1.0mL
  1.0mm	5.4mL	1.5mL
  1.5mm	8.0mL	2.0mL

  
  注：下层胶体积已包含适量冗余，请勿全部用于灌制下层胶，以免灌胶时上层胶高度不够。
  
• 参考下表，在相应浓度的SDS-PAGE下层胶预混液中，按照1%的比例加入相应量的10%凝胶聚合催化剂溶液，按照0.04%的比例加入相应量的TEMED。例如10mL 10% SDS-PAGE一步法下层胶预混液中，加入100μL 10%凝胶聚合催化剂溶液和4μL TEMED。适当混匀后倒入到制胶模具中，无须等待下层胶凝固，可直接注入配制好的上层胶混合液。也可以用蒸馏水或异丙醇封住液面，直至下层胶充分凝固，通常10～30分钟内胶会凝固。
  注：具体的凝固时间和温度及光照有关，说明书中10%凝胶聚合催化剂和TEMED的推荐用量是室温为25℃时的用量。为达到与25℃时相近的凝固时间，当室温低于25℃时，可以适当同时加大10%凝胶聚合催化剂和TEMED的用量，例如20℃时建议用量是正常推荐用量的1.5倍，15℃时建议用量是正常推荐用量的2倍。
  

  成分	配制不同体积SDS-PAGE下层胶所需各成分的体积(mL)
  SDS-PAGE一步法下层胶预混液	5	10	15	20	30	50
  10%凝胶聚合催化剂溶液	0.05	0.1	0.15	0.2	0.3	0.5
  TEMED	0.002	0.004	0.008	0.008	0.012	0.02

• 参考下表，在SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液中，按照1%的比例加入相应量的10%凝胶聚合催化剂溶液，按照0.1%的比例加入相应量的TEMED。例如10mL SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液中，加入100μL 10%凝胶聚合催化剂溶液和10μL TEMED，适当混匀。可在下层胶灌注后，直接将配制好的SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液紧贴玻璃板均匀轻柔注入到下层胶上，随后小心插入梳子等待凝固。
  如果进行了液封，需去除下层胶上面覆盖的液体，尽量去干净，然后倒入配制好的SDS-PAGE一步法上层胶预混液，插入梳子等待凝固。待上层胶凝固后，即可进行后续的电泳实验。
  注1：SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液使用前须摇匀。
  注2：一步法直接加入上层胶混合液时一定要轻缓并左右平移加入，而不是集中在一个位置灌制，以免上层胶溶液冲入下层胶而破坏上下层胶分界线的平整度，建议使用1mL移液器缓慢、均匀、左右平移加入。
  注3：一步法直接加入上层胶混合液，上下层胶分界线的平整度可能会稍差于液封法，但不影响后续电泳结果。
  

  成分	配制不同体积SDS-PAGE上层胶所需各成分的体积(mL)
  SDS-PAGE一步法红色上层胶预混液	2	3	4	6	8	10
  10%凝胶聚合催化剂溶液	0.02	0.03	0.04	0.06	0.08	0.1
  TEMED	0.002	0.003	0.004	0.006	0.008	0.01

• 配制好的凝胶如果当天不能使用，可在4℃保存1～2天后使用，但通常新鲜配制凝胶的电泳效果更佳。